儲存條件

4℃避光冷藏，請勿凍存。有效期見外包裝。

光譜特性

Annexin V-APC：Ex/Em = 650/660 nm

產品介紹

Annexin V（膜聯蛋白-V）是一種分子量為35-36 KD的Ca²⁺依賴性磷脂結合蛋白，可與磷脂酰絲氨酸（PS）選擇性結合。磷脂酰絲氨酸（PS）主要分布在細胞膜內側，即與細胞漿相鄰的一側。在細胞發生凋亡的早期，不同類型的細胞都會把磷脂酰絲氨酸外翻到細胞表面，暴露在細胞外環境中。此時，使用熒光蛋白APC標記的 Annexin V，即 Annexin V-APC，與外翻的磷脂酰絲氨酸（PS）結合，就可用流式細胞儀直接檢測到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。正常細胞不會被Annexin V-APC所染色，發生凋亡或壞死的細胞會被Annexin V-APC所染色。Annexin V-APC可以與部分非滲透性的細胞核染料 ( 7-AAD/PI ) 等聯合使用，區分處于不同凋亡時期的細胞。

注意事項

1. 使用前請將產品瞬時離心至管底，再進行后續實驗。

2. 為降低細胞凋亡進程，孵育過程可在冰上操作，但孵育時間至少延長至30 min。

3. 由于細胞凋亡是一個快速的過程，建議樣品在染色后 1 h之內進行分析。

4. 對于貼壁細胞，消化是一個關鍵步驟。貼壁細胞誘導細胞凋亡時如有漂浮細胞，需收集漂浮細胞和貼壁細胞后合并染色。處理貼壁細胞時要小心操作，盡量避免人為的損傷細胞。胰酶消化時間過短，細胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細胞膜的損傷，PI 攝入過多；消化時間過長，細胞膜同樣易造成損傷，甚至會影響細胞膜上磷脂酰絲氨酸與 Annexin V-APC的結合。消化時將胰酶鋪滿孔板底后，輕搖時胰酶與細胞充分接觸，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時間，待細胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用 EDTA，EDTA 會影響 Annexin V 與 PS 的結合。

5. 貼壁細胞用胰蛋白酶消化后，建議在最佳培養條件和培養基中恢復約30 min后染色，避免假陽性。

6. 為了避免洗滌細胞時損失細胞，在吸液時可以用大的 Tip 頭套上小的 Tip 頭吸液。

7. 染料的最佳使用濃度由具體實驗要求確定。

8. 熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。